כיצד להשתמש במנתח PCR בזמן אמת

הכנה לדוגמא:

איסוף מדגם: אסוף דגימות כמו דם, רקמות, רוק ושתן בהתאם למטרת הניסוי.

מיצוי DNA: השתמש בערכת מיצוי DNA ייעודית כדי לחלץ DNA מהמדגם.

הכנת תגובת PCR:

פריימרים עיצוביים: תכנן זוגות פריימר ספציפיים המבוססים על רצף היעד להגברה של DNA של התבנית.

הכן תערובת תגובה: כולל DNA של תבנית, פריימרים, חיץ, פולימראז DNA, DNTPs (Deoxynucleoside Triphosphates), Mg 2+, וכו '.

הגדר תוכנית PCR:

הגדרות מכשירי PCR: הזן את הפרמטרים של מחזור ה- PCR מראש, כגון טמפרטורת חימום מראש של 95 מעלות, טמפרטורת denaturation (כגון 95 מעלות), טמפרטורת חישול (כגון 55 מעלות), טמפרטורת הרחבה (כגון 72 מעלות) ומספר מחזורים.

תגובת PCR:

הוסף מדגם: הוסף את תערובת התגובה למיכל התגובה או השבב של PCR, ולכל דגימה בדרך כלל יש תגובה אחת היטב.

בצע PCR: מכשיר ה- PCR מחזור על פי התוכנית מראש, כולל שלבי חימום, קירור, חישול והרחבה.

ניתוח מוצרים:

קירור לאחר הגברה: לאחר סיום ה- PCR, הדגימה מקוררת בקצרה תוך 4 מעלות.

הפרדה אלקטרופורטית: השתמש בטכנולוגיית אלקטרופורזה של ג'ל, כמו אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז, כדי להפריד בין מוצרי PCR באורכים שונים.

סריקת פלואורסצנט: פריימרים שכותרתו פלורסנטית פולטים אור באורך גל ספציפי במוצר המוגבר, ומכשיר ה- PCR קורא אותות אלה ומקליט אותם.

עיבוד נתונים ופרשנות:

תוכנת ניתוח נתונים: השתמש בתוכנה מיוחדת כדי לנתח את האות הפלואורסצנטי ולחשב את הריכוז או הריכוז היחסי של שבר היעד.

פרשנות תוצאות: בהתבסס על עקומת ה- PCR וקו הבסיס, קבע אם ה- PCR מצליח, האם שבר היעד קיים וכמה הוא.

הקלטת תוצאות ושימור:

רשמו את התוצאות בדוח הניסוי ושמרו כראוי את הנתונים והדגימות המקוריים.